微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營養物濃度、溫度、水分、氧氣、pＨ等。微生物的種類不同，培養的方式和條件也不盡相同。通常分為： 
1、一般培養法（需氧培養）    
培養溫度：25~37℃ 。
2、厭氧培養方法
①簡易的厭氧培養法：
A、庖肉培養法
B、鐵絲圈厭氧培養法
C、焦性沒食子酸法
②厭氧罐法
③厭氧手套箱法
 
厭氧缸法：
厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境，從而將厭氧菌培養出來。
接種好標本的平板或液體培養基試管，可放入厭氧缸內培養。
厭氧罐法：
裝入待培養的對象，然后密閉罐蓋，接著可采用抽真空→灌氮→抽真空→灌氮→抽真空→灌混合氣（N2∶CO2∶H2=80∶10∶10，V/V）。
 
 
 
3、二氧化碳培養法
（1）燭缸法
（2）二氧化碳置換法
（3）化學法
每一升用重碳酸鈉0.4克與濃鹽酸0.35亳升加入。
（4）二氧化碳培養箱法
 
 
微生物常規鑒定技術



 
1、形態結構和培養特性觀察
（1）在固體培養基上，觀察：
菌落大小、形態、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等；
（2）在液體培養中：
表面生長情況（菌膜、環）混濁度及沉淀等；
（3）半固體培養基穿刺接種：
觀察運動、擴散情況。
 
 
2、染色鏡檢
（1）染色原理
由于微生物細胞含有大量水分，機體是無色透明的，與周圍背景沒有明顯的反差， 須進行染色，使經染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態和結構。 
微生物中細菌、致病菌是很小的生物體，須通過染色的方法，在顯微鏡下才能看得清楚，并且還可以通過染色的方法鑒別革蘭氏染色特性，以及是否長有鞭毛、周毛、莢膜和芽孢等。
 
（2）染色方法
①簡單染色法
簡單染色法又叫作普通染色法，只用一種染料使細菌染上顏色，觀察細菌的形態。
②復染色法
用兩種或多種染料染細菌，目的是為了鑒別不同性質的細菌，所以又叫鑒別染色法。主要的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法。
 
（3）革蘭氏染色法
①原理
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。1884年由丹麥醫師Gram創立。染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；
染色反應呈紅色的稱為革蘭氏陰性細菌，用G―表示。
細菌對革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。
②細菌的革蘭氏染色步驟
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復染→水洗→干燥→觀察
A）取培養物分別做涂片、干燥、固定，方法均與簡單染色的相同；
B）用草酸銨結晶紫染色1min后水洗；
C）加碘液媒染1min后水洗；
D）斜置載玻片，滴加95％乙醇脫色，至流出的乙醇不現紫色為止，大約需時20-30s，隨即水洗；
E）用蕃紅染液復染30s，水洗；
F）用吸水紙吸掉水滴，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發現目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色。